他克莫司（Tacrolimus）的EP全套杂质有哪些？

本次提取自欧洲药典11.0版（EP 11.0）他克莫司一水合物专论，共收载控制杂质7种，其中明确指定杂质（Specified impurity）1种，其他可检出杂质（Other detectable impurities）6种，有关物质检测采用反相高效液相色谱法（HPLC），检测波长为220 nm。

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杂质A

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity A
• 化学名：(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-8-ethyl-5,19-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)- 4-hydroxy-3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2- yl]-14,16-dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl- 3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- octadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：11011-38-4
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C(C)=C/C@@(CC)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)OC@(C@@(OC)C1)C@@(OC)C[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：有
• CATO货号：C4X-130064

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杂质B

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity B
• 化学名：(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19S,26aS)-8-ethyl-5,19-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)- 4-hydroxy-3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2- yl]-14,16-dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl- 3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- octadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：—
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C(C)=C/C@@(CC)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)[C@@]2(O)OC@(C@@(OC)C1)C@@(OC)C[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-130045

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杂质C

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity C
• 化学名：(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-5,19-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy- 3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-14,16- dimethoxy-4,12,18-trimethyl-8-(prop-2-en-1-yl)- 3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- octadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：—
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C=C/C@@(CC=C)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)OC@(C@@(OC)C1)C@@(OC)C[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-130025

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杂质D

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity D
• 化学名：(3S,4R,5S,8S,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-5,19-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy- 3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-14,16- dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl-8-(prop-2-en-1-yl)- 3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- octadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：—
• SMILES：*[C@]1([H])CC@(/C=C(\C)[C@@]2([H])OC(=O)[C@]3([H])CCCCN3C(=O)C(=O)[C@]3(O)OC@(C@@(OC)CC@@(C)C/C(C)=C/C@(CC=C)C(=O)CC@(O)[C@@]2([H])C)C@@(OC)C[C@@]3([H])C)CC[C@@]1([H])O
• EP官方CRS：无
• CATO货号：—

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杂质E

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity E
• 化学名：(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-5,19-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy- 3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-14,16- dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl-8-propyl- 3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- octadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：104987-30-6
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C(C)=C/C@@(CCC)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)OC@(C@@(OC)C1)C@@(OC)C[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：无
• CATO货号：CIM-105406

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杂质F

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity F
• 化学名：(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)-5,15-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy- 3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-14,16- dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl-8-(prop-2-en- 1-yl)-3,4,5,6,11,12,13,14,15,16,17,18,24,25,26,26a- hexadecahydro-7H-pyrido[2,1-c][1,4]oxaazacyclotricosine- 1,7,19,20,21(8H,23H)-pentone
• CAS：1393890-33-9
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C(C)=C/C@@(CC=C)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)C(=O)C@(C)CC@(OC)C@(O)C@@(OC)C1
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-130018

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杂质G

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity G
• 化学名：(3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19S,26aS)-5,19-dihydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy- 3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-14,16- dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl-8-(prop-2-en-1-yl)- 3,4,5,6,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- octadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：144490-63-1
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C(C)=C/C@@(CC=C)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)[C@@]2(O)OC@(C@@(OC)C1)C@@(OC)C[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-130019

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杂质H

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity H
• 化学名：(1E,3S,4R,5S,8R,9E,12S,14S)-5-hydroxy-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy-3-methoxycyclohexyl]-14-methoxy-14- [(2R,3S,5R)-3-methoxy-5-methyl-6-oxooxan-2-yl]- 2,4,10,12-tetramethyl-7-oxo-8-(prop-2-en-1-yl)tetradeca- 1,9-dien-3-yl (2S)-1-formylpiperidine-2-carboxylate
• CAS：143210-33-7
• SMILES：[H]C@(C/C(C)=C/C@@(CC=C)C(=O)CC@(O)C@@(C)C@(OC(=O)[C@]1([H])CCCCN1C=O)/C(C)=C/[C@]1([H])CCC@@(O)C@(OC)C1)CC@(OC)[C@@]1([H])OC(=O)C@(C)C[C@]1([H])OC
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-130010

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杂质I

• 官方名称：Tacrolimus Monohydrate EP Impurity I
• 化学名：(3S,4R,5E,8R,9E,12S,14S,15R,16S,18R,19R,26aS)- 19-hydroxy-3-[(1E)-1-[(1R,3R,4R)-4-hydroxy- 3-methoxycyclohexyl]prop-1-en-2-yl]-14,16- dimethoxy-4,10,12,18-tetramethyl-8-(prop-2-en- 1-yl)-3,4,8,11,12,13,14,15,16,17,18,19,24,25,26,26a- hexadecahydro-7H-15,19-epoxypyrido[2,1- c][1,4]oxaazacyclotricosine-1,7,20,21(23H)-tetrone
• CAS：104987-16-8
• SMILES：[H][C@]1(C)C/C(C)=C/C@@(CC=C)C(=O)/C=C/C@@(C)C@@(/C(C)=C/[C@]2([H])CCC@@(O)C@(OC)C2)OC(=O)[C@]2([H])CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)OC@(C@@(OC)C1)C@@(OC)C[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-13005

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数据来源： 欧洲药典（EP 11.0）Tacrolimus专论原文 Disregard limit： 0.05 per cent Total impurities limit： maximum 1.0 per cent

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他克莫司有关物质检测的核心难点在于结构类似杂质的分离。多数杂质与主成分仅存在手性中心构型差异或者侧链烷基取代差异，结构相似度极高，对色谱选择性要求严苛。EP方法采用3μm粒径的封端十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱温提升至60℃改善峰形，同时采用梯度洗脱实现多杂质分离，其中杂质A与主成分峰相对保留仅约0.9，方法要求系统适用性中二者分离度不得低于3.0，对色谱柱性能和流动相比例控制要求较高。此外，杂质B与他克莫司化合物I共洗脱，需采用切线撇峰法积分，同时保证他克莫司化合物I峰保持高斯峰形，积分方法的一致性直接影响杂质定量结果准确性。对于手性杂质，若存在未分离对映异构体，可尝试采用直链淀粉或纤维素类手性色谱柱进一步拆分（推断），配合LC-MS/MS可提高检测灵敏度。

从NMPA审评视角来看，他克莫司作为发酵来源的原料药，杂质谱研究是仿制药注册申报的核心核查项目。NMPA要求仿制药杂质谱必须与原研药一致，对于EP收载的指定杂质A，若生产过程中实际检出超过报告阈值，必须提供结构确证资料和合格的杂质对照品完成定量研究。按照ICH Q3A要求，单个未指定杂质不得超过0.15%，超过该限度需要进行安全性评估。EMA监管要求与EP一致，均严格控制指定杂质A的限度不超过0.5%，总杂质不超过1.0%。对于发酵工艺产生的未知杂质，建议提供多批次生产的杂质谱数据，证明杂质水平稳定可控（推断）。

对于已有EP官方CRS的杂质A，可直接通过EDQM购买获得，是方法学验证的首选对照品。其余EP收载的杂质均未提供官方CRS，企业需要自行解决对照品来源，杂质的纯度标定和溯源性直接影响有关物质方法学验证的有效性。对于其他可检出杂质，EP不要求强制鉴定，但若实际生产中检出超过0.15%的单个杂质，仍需按照ICH Q3A要求完成结构确证和安全性评估。如需获取他克莫司（Tacrolimus）EP杂质对照品，包括EP未提供官方CRS的杂质，欢迎联系CATO Research Chemicals（佳途科技）获取支持。

CATO Research Chemicals（佳途科技）提供他克莫司（Tacrolimus）全套EP杂质对照品，所有产品均通过ISO 17034双认证（CNAS + ANAB），每批次产品附带完整COA及溯源证书，完全满足EMA、NMPA及ICH指导原则下的注册申报需求。